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    解決方案

    大腸桿菌發(fā)酵解決方案

    發(fā)布時(shí)間:2024-07-29 瀏覽次數:1219



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    培養基選擇:

    LB培養基(種子培養基) :胰蛋白胨5g,酵母粉2.5g,NaCl5g,溶于500mlH2O,NaOH調節pH7.0, 2L三角瓶裝,滅菌鍋濕熱高壓滅菌121, 20min,室溫保存.  

    TB培養基(發(fā)酵培養基) : 胰蛋白胨240g, 酵母粉480g, 甘油80g,消泡劑1ml, 溶于H2O, 定容至19L,B. Braun發(fā)酵罐在位滅菌121, 15min.

    配制種子固體培養基100mL,分裝試管,0.1MPa 滅菌20min,然后擺成斜面。

    配制種子培養液1200mL,分裝平均分裝于三個(gè)500mL三角瓶中,同上滅菌。

     

    培養方式:

      大腸桿菌發(fā)酵大多采用補料分批培養,這是在現代發(fā)酵工藝得到優(yōu)化的一種方式,能有效的優(yōu)化微生物培養過(guò)程中的化學(xué)環(huán)境。使微生物處于最佳的生長(cháng)環(huán)境。這種方式一方面可以避免某些營(yíng)養成分初始濃度過(guò)高出現底物抑制現象,另一方面能夠防止限制性營(yíng)養成分被耗盡而影響細胞的生長(cháng)和產(chǎn)物的形成。補料分批培養已廣泛應用于各種各樣的初級、次級生物產(chǎn)品和蛋白等的發(fā)酵生產(chǎn)中。

        培養基營(yíng)養成分過(guò)高會(huì )抑制細胞的生長(cháng),采用流加補料是提高細胞濃度和外源蛋白產(chǎn)量的有效方式,高密度培養通過(guò)調節限制性底物的流加速率來(lái)調控細胞生長(cháng)。

     

    培養條件:

    1、溫度:36~38 ℃

    2、pH 7

    3、攪拌速率:100~200r/min

    4、溶氧:   20~50%

    5、通風(fēng):1:2VVM

    6、接種量:1~2%

     

    操作步驟:

    1、菌種準備

    2、上罐前的準備及實(shí)罐滅菌

    3、發(fā)酵操作

    4、發(fā)酵管理

    5、發(fā)酵過(guò)程中各生化指標的測定

    6、補料

    7、放罐

    8、清洗


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